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一般需要拍X光片，骨盆正位片、腰椎正侧位片、颈椎正位片；有关化验项目：HLA－B27、血沉、抗O、类风湿因子、C反应蛋白、补体C3、C4，免疫球蛋白A/G/M，血常规等，就可以诊断。
放射学检查是诊断强直性脊柱炎的关键。因为所有强直性脊柱炎均有骶髂关节炎，且骶髂关节为本病最早受累部位，所以对怀疑有强直性脊柱炎者，应摄骨盆正位片。骶髂关节的X线上可以表现为骶髂关节两侧的斑点状硬化、侵蚀、关节间隙狭窄，最后骶髂关节融合强直。虽然骶髂关节病变发生早，而且是诊断的重要依据，但最为典型的X线表现是腰椎的竹节样病变，因此，腰椎的正、侧位片在这些病人不能省去。当骶髂关节在平片上表现不明显时，CT、放射性核扫描、磁共振等影像学检查对疾病的早期诊断会提供很大帮助。需提醒病人注意的是：在做骶髂关节X线检查前一天的晚间应服用导泻剂，在晨起排便后再拍片，以保证X线片的清晰度。
强直性脊柱炎的血液化验常无特异性改变。虽然90％以上病人血清中HLA—B27阳性，但也只能作为诊断的参考。疾病活动期的病人大多血沉增快，半数以上的病人血清C反应蛋白增高和免疫球蛋白升高，因此可用作辅助指标来监测疾病的活动程度。
强直性脊柱炎症状的诊断检查指标不多，而且无特异性，缺乏诊断意义，主要用于病情活动性判定和疗效估计。
在强直性脊柱炎活动期，可见血沉增快、C反应蛋白升高及轻度低色素性贫血。类风湿因子阳性率不高于正常人群。免疫球蛋白A(IgA)可轻度至中度升高，与强直性脊柱炎病情活动有关，伴外周关节受累者可有免疫球蛋白G、M(IgG、IgM)升高。伴有外周关节受累者，还可有血清补体的C3碎片和C4升高。血清循环免疫复合物可升高。笔者统计100例强直性脊柱炎中，血沉增快的有51例，最高达102毫米／小时；类风湿因子阳性者仅9例，而且滴度均较低。
自1973年首次报道强直性脊柱炎与人类白细胞抗原 (HLA)之间有关联以来，在这方面已有大量报追；认为不同地区、不同种族中强直性脊柱炎均与人类白细胞抗原B27(HLA—B27)紧密关联,强直性脊柱炎的人类白细胞抗原B27(HLA— B27)阳性率大约为90%。故HLA-B27检查对诊断有参考价值，尤其对临床高度疑似的病人。但毕竟还有10％左右的强直性脊柱炎HLA—B27阴性，故HLA—B27阴性也不能除外本病:另一方面，在正常人群中也有4％—8％BLA-B27阳性。因此仅凭HLA—B27：阳性也不能诊断为强直性脊柱炎。
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