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强直性脊柱炎患者常常被误诊，是由于患者的延误就医及医师的免疫学知识不足。要诊断 强直性脊柱炎并不难，经由详细的病史询问、理学检查、X线拍片及医师的警觉心，再配合必要时的实验室检查。
病史询问 、发病年龄；有否典型的 强直性脊柱炎症状：如慢性下腰痛、晨间脊椎僵硬及运动范围受限等 ；有否其他肌肉骨骼或关节外症状；家族病史；理学检查；检查骶髂关节的疼痛；脊椎弯曲度的测量；深吸、呼间胸围的测量。另外亦应检查脚後跟、足底、胸骨等处有无压痛或肿胀；眼睛、心脏、肺部等处的理学检查也不能忘记。
实验室检查
诊断 强直性脊柱炎，必要时需配合实验室检查。血中炎性指标（如CRP及ESR）於AS活性期可见增加；血中免疫球蛋白可能增加(尤其是A型免疫球蛋白)。对於诊断不明确的患者，「B27型人类白血球抗原」(HLA-B27)阳性与否可为参考。
X光摄影，X光摄影对诊断极有帮助，骶髂关节炎与脊椎炎皆可经由一般X光摄影得到诊断。
核医学检查
核医学骨骼扫描(Bone scan)对 强直性脊柱炎的价值在追踪及评估疾病的活性，对早期骶髂关节炎的诊断亦有帮助，但对已经纤维化或 融合的病灶则无助益，不能用以评估疾病的严重度。
诊断标准
强直性脊柱炎诊断标准 (Modified New York criteria,1984)
1.下腰痛及僵硬，休息无法减轻，3个月以上
2.扩胸范围受限
3.腰椎运动范围受限
4.X光有骶髂关节炎，双侧2级或单侧3级以上
确定诊断：
新的诊断标准(Linden criteria,1987)
1.炎症性下腰痛，45岁以前发病
2.HLA-B27阳性或家人有AS病史，且有下列 任何一点者：
a.反覆性无法解释的胸痛或僵硬
b.单侧葡萄膜炎及肌腱,韧带与骨骼交接处的发炎
c.其他血清阴性脊椎关节病变
3.腰椎运动范围受限
4.扩胸范围受限
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